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細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
2024-11-19
一、光學(xué)顯微鏡觀察凋亡細(xì)胞的主要特征為核染色質(zhì)致密深染，形成致密質(zhì)塊，有時(shí)可碎裂。檢測(cè)方法：細(xì)胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細(xì)胞的形態(tài)改變，結(jié)合顯微測(cè)量工具可作凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)。二、視頻時(shí)差顯微技術(shù)細(xì)胞培養(yǎng)中常用，通過(guò)相差顯微鏡可動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞凋亡的變化過(guò)程，尤其是觀察細(xì)胞表和外形的變化。檢測(cè)方法：收集2×10^5細(xì)胞/ml培養(yǎng)的細(xì)胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導(dǎo)劑，在帶有自動(dòng)攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞的動(dòng)態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影...
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PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的嵌合體是什么？
2024-11-18
PCR實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產(chǎn)生的呢？那又如何預(yù)防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴(kuò)增反應(yīng)中的嵌合體是指一個(gè)PCR產(chǎn)物來(lái)自兩個(gè)或多個(gè)模板分子，通常是由于延伸未完quan導(dǎo)致的?。這種現(xiàn)象通常發(fā)生在PCR反應(yīng)中，特別是當(dāng)使用多重PCR或復(fù)雜模板時(shí)。嵌合體會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增產(chǎn)物中含有非預(yù)期的片段，有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，甚至導(dǎo)致錯(cuò)誤的解釋。二、形成原理在PCR反應(yīng)中，DNA模板在...
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流式細(xì)胞儀怎么分選T細(xì)胞?
2024-11-18
上文介紹了流式細(xì)胞術(shù)的原理及應(yīng)用，今天讓我們學(xué)習(xí)一下怎么用流式細(xì)胞儀分選T細(xì)胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標(biāo)記：根據(jù)抗體說(shuō)明書標(biāo)記實(shí)驗(yàn)管?；靹蚝螅覝乇芄夥跤?5分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機(jī)檢測(cè)：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過(guò)濾，避光等待上機(jī)檢測(cè)。二、儀...
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流式細(xì)胞術(shù)原理及應(yīng)用
2024-11-15
流式細(xì)胞儀在手，卻不知道原理？快來(lái)看看這篇文章吧！一、流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)原理流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種單細(xì)胞定量分析技術(shù)，該技術(shù)通過(guò)測(cè)定庫(kù)爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數(shù)，可以定量分析細(xì)胞的結(jié)構(gòu)特征（如DNA含量、蛋白、細(xì)胞膜、胞漿或胞核抗原表達(dá)量）和功能特征（如細(xì)胞內(nèi)酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數(shù)，進(jìn)行細(xì)胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細(xì)胞分離并計(jì)數(shù)，將感興趣的細(xì)胞分選出來(lái)，提供分類比例并進(jìn)行進(jìn)一步分析。二、流式細(xì)胞技術(shù)應(yīng)用1...
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引物探針的使用方法有哪些？
2024-11-14
一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設(shè)計(jì)引物和探針?：首先需要根據(jù)目標(biāo)DNA序列設(shè)計(jì)特異性引物和探針。引物的長(zhǎng)度一般為20-25個(gè)核苷酸，探針的長(zhǎng)度一般為15-25個(gè)核苷酸。設(shè)計(jì)時(shí)要注意避免非特異性擴(kuò)增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測(cè)樣本中提取DNA，作為PCR反應(yīng)的模板。確保模板DNA的質(zhì)量和濃度，以獲得可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應(yīng)體系?：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，配制含有引...
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IHC出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性等問(wèn)題該怎么辦?
2024-11-13
?免疫組化（IHC）實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽(yáng)性的處理1.?降低一抗?jié)舛?：通過(guò)降低一抗的濃度，可以減少非特異性結(jié)合，從而降低假陽(yáng)性。通常，降低濃度至能看到陽(yáng)性表達(dá)且能明顯區(qū)分陽(yáng)性區(qū)域與周圍間質(zhì)即可?。2.?調(diào)整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調(diào)整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對(duì)于動(dòng)物標(biāo)本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應(yīng)引...
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離心柱法提取DNA步驟
2024-11-13
常見核酸提取純化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分離技術(shù)、離心柱純化法等，今天我們來(lái)看下離心柱法的實(shí)驗(yàn)步驟和優(yōu)缺點(diǎn)吧~一、離心柱法提取DNA步驟離心柱法提取DNA步驟一將組織或細(xì)胞懸液加入裂解緩沖液，渦旋混勻。裂解緩沖液中含有變性劑（如胍異硫氰酸鹽），可以有效地裂解細(xì)胞和組織，破壞細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜，同時(shí)使核酸與蛋白質(zhì)分離。離心柱法提取DNA步驟二將裂解液轉(zhuǎn)移到DNASpinColumn中，離心收集流穿液。這個(gè)步驟涉及到將裂解液通過(guò)一個(gè)特殊的膜過(guò)濾，該膜具有特定的孔徑，允許小分子...
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Alzet滲透泵濃度你會(huì)計(jì)算嗎？
2024-11-12
藥物濃度的調(diào)配需根據(jù)每日用藥量和緩釋泵的輸送速率兩項(xiàng)參數(shù)來(lái)計(jì)算，每日用藥量可通過(guò)查閱專業(yè)文獻(xiàn)獲取。此外，每支緩釋泵的輸送速率信息會(huì)附在包裝盒上，應(yīng)根據(jù)包裝上的速率進(jìn)行配藥。濃度計(jì)算舉例：2001滲透泵，給藥：抗利尿激素(ADH)，1.查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，大鼠正常的ADH分泌量為30ng/天/只，或1.25ng/小時(shí)/只。然后，計(jì)算出完成1.25ng/小時(shí)所需輸注量所需的ADH濃度：ko=Q?Cd其中ko(µg/hr)是質(zhì)量輸送速率，Cd(µg/µ...
服務(wù)熱線：022-66387942
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